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生化培養(yǎng)箱對于枯萎病病原菌室內(nèi)毒力測定

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2019-09-11 10:03【

橡膠樹( Hevea brasiliensis) 生產(chǎn)的乳膠是我國重要的戰(zhàn)略資源,隨著橡膠樹種植年代增加及周邊生態(tài) 環(huán)境變化,一些新的病蟲害逐漸顯現(xiàn)出來。2017 年在對海南省瓊中加釵農(nóng)場橡膠樹的病情調(diào)查中發(fā)現(xiàn) 尖孢鐮刀菌( Fusarium oxysporum) 引起了橡膠樹枯萎病。該病導(dǎo)致橡膠幼樹頂梢自上而下回枯變褐,呈現(xiàn) “半邊死”癥狀??菟乐l莖干木質(zhì)部髓心變褐,木質(zhì)部橫切面有零散分布的藍(lán)變癥狀。

1 材料與方法

1. 1 材料

供試菌種: 供試尖孢鐮刀菌( Fusarium oxysporum) 分離于海南省瓊中加釵農(nóng)場熱研 7 - 33 - 97 橡膠樹幼樹枝條。供試藥劑: 97. 3 % 咪鮮胺( prochloraz) 原藥購自江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司; 97 % 異菌脲( iprodione) 原藥購自江蘇快達(dá)農(nóng)化股份有限公司; 96 % 百菌清( chlorothalonil) 原藥購自山東青島 奧迪斯生物科技有限公司; 96% 吡唑醚菌酯( pyraclostrobin) 購自海南正業(yè)中農(nóng)高科股份有限公司; 97. 2 % 多菌靈( carbendazim) 原藥購自江蘇省太倉市農(nóng)藥廠; 99 % 水楊羥肟酸( SHAM) 購自上海麥克林 生化科技有限公司。將各原藥配成10 000 mg·L - 1 的母液,4 ℃保存。供試培養(yǎng)基: PDA( 馬鈴薯葡萄糖瓊 脂) 培養(yǎng)基: 馬鈴薯 200 g,葡萄糖 15 g,瓊脂粉 15 g,蒸餾水 1 000 mL,滅菌備用。

1. 2 方法

1. 2. 1 含藥平板的制備

分別取各藥劑母液加入到定量的 PDA 培養(yǎng)基中搖晃混勻,使培養(yǎng)基含咪鮮胺的濃度為 0,0. 1,0. 5,1,5,10 mg·L - 1 ,含百菌清的濃度為 0,1,2,4,8,16 mg·L - 1 ,含吡唑嘧菌酯的濃度 為 0,0. 1,0. 5,1,5,10 mg·L - 1 ( 為降低旁路呼吸途徑對藥劑的影響,供試培養(yǎng)基中加入終濃度為 100 mg·L - 1 的水楊羥肟酸) ,含多菌靈的濃度為 0,0. 1,0. 5,1,5,10 mg·L - 1 。將含藥培養(yǎng)基倒入滅菌的 培養(yǎng)皿中,每皿 20 mL,每個處理設(shè)置 3 個重復(fù)。

1. 2. 2 處理方式

取制作好的含藥平板,空白對照為不加藥劑的 PDA 平板。使用 5 mm 打孔器在 PDA 培養(yǎng)基上 28 ℃培養(yǎng) 2 d 的病原菌菌落邊緣取菌碟,分別接于處理培養(yǎng)基平板的中心位置上,每個處理 做 3 個重復(fù),放置于 28 ℃生化培養(yǎng)箱(上海精宏SHP-080生化培養(yǎng)箱
)內(nèi)培養(yǎng),于對照組菌落生長 6 ~ 7 cm 時,用十字交叉法測量菌落直徑 并記錄。


1. 2. 3 藥劑復(fù)配

選取 2 種藥效作用較好的藥劑進(jìn)行復(fù)配,以 EC50濃度按照不同比例配比,配比為 1∶ 1, 1∶ 3,1∶ 5,3∶ 1,5∶ 1。再在不同比例配比下設(shè)置 5 個濃度梯度,濃度稀釋按照逐級稀釋法稀釋濃度,實驗按 照 1. 2. 2 和 1. 2. 3 中所述方法進(jìn)行。

1. 2. 4 數(shù)據(jù)處理

使用 EXCEL2016,DPS7. 05 數(shù)據(jù)處理軟件對所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,得出各藥劑的 毒力回歸方程、EC50和相關(guān)系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2. 1 4 種殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果

4 種殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果見 表 1。由表 1 可見,4 種常見殺菌劑對尖孢鐮刀菌絲的生長抑制效果為: 咪鮮胺 > 多菌靈 > 吡唑醚菌酯 > 百菌清。結(jié)果表明,麥角甾醇合成抑制劑類殺菌劑的咪鮮胺和有機雜環(huán)類( 苯并咪唑類) 殺菌劑的多菌靈 對尖孢鐮刀菌具有較高的抑制活性,故選擇咪鮮胺和多菌靈作為單劑進(jìn)行下一階段的復(fù)配實驗。

2. 2 復(fù)配殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果

復(fù)配殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果見 表 2,由表 2 可見,咪鮮胺和多菌靈 1∶ 1,1∶ 3,1∶ 5,3∶ 1 及 5∶ 1 復(fù)配條件下 EC50值分別為 0. 96,0. 71,0. 17, 0. 87,1. 01 mg·L - 1 ,1∶ 5 的復(fù)配效果最佳,5∶ 1 的復(fù)配效果最差。咪鮮胺和多菌靈的復(fù)配增效系數(shù)見表 3,由表 3 可見,咪鮮胺和多菌靈 1∶ 1,1∶ 3,3∶ 1 及 5: 1 復(fù)配條件 下增效系數(shù)分別為 0. 92,1. 37,0. 92,0. 77,均在 0. 5 ~ 1. 5 之間,2 者藥效作用為相加作用,無拮抗作用。 咪鮮胺和多菌靈配比在 1∶ 5 時,SR 值為 6. 01,表現(xiàn)為增效作用。

3 討 論

對 4 種常見殺菌劑對橡膠樹尖孢鐮刀菌絲的生長抑制進(jìn)行了測定,除百菌清外,咪鮮胺、多菌 靈、吡唑醚菌酯抑制菌絲效果顯著。其中麥角甾醇合成抑制劑類殺菌劑的咪鮮胺和有機雜環(huán)類( 苯并咪 唑) 殺菌劑的多菌靈對橡膠樹尖孢鐮刀菌的抑菌效果尤為突出,故選擇咪鮮胺和多菌靈進(jìn)行復(fù)配實驗,通 過 5 種不同比例復(fù)配得出的抑菌效果來看,其中咪鮮胺: 多菌靈為 1∶ 5 的復(fù)配效果最佳,表現(xiàn)為增效作用, 并且 EC50達(dá)到了 0. 17 mg·L - 1 ,效果優(yōu)于任何一種單劑。 綜上所述,橡膠樹枯萎病可由常用藥劑進(jìn)行防治,鑒于咪鮮胺與多菌靈的復(fù)配效果尤為突出,推薦在 病害發(fā)生時采用,避免單一藥劑的過度使用所導(dǎo)致病菌抗藥性的增強。




 


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